La comparaison de potentiel redox de riboflavine et de bleu de méthylène.

La détérmination de la péroxydase (le donneur: H2O – l’oxydoréductase; EC 1.11.1.) dans le raifort.

On met dans le tube à essai 1 ml d’extrait aqueux du raifort, on ajoute 5 gouttes de solution alcoolique de benzidine et puis 2 gouttes de solution 0,5% de peroxyde d'hydrogène. La coloration bleue foncée est conditionnée par l’oxydation de benzidine en n,n’ – dyiminobiphénylquinone:

La détérmination de la déshydrogénase (la xanthine oxydase, l’aldéhyde déshydrogénase, EC 1.2.1.3) dans le lait (la réaction de Chardinger).

On met 2 ml de lait dans 3 tubes. On chauffe un tube pendant 2-3 minutes et on le laisse rafraîchir. On met dans ce tube et dans un tube non-chauffé 0,5 ml de solution 0,4% de formaldéhyde, dans l’autre – 0,5 ml d’eau. Puis on met dans tout les 3 tubes 2 gouttes de bleu de méthylène 0,01%. On brasse soignesement le contenu des tubes et on ajoute dans tous les tubes 3-4 gouttes d’huile de vaseline. On met tout les tubes dans la bain-marie de 40 ^oC. Dans certains temps la solution dans le tube non-chauffé contenant le substrat se décolore à la suite de formation de la forme réduite de bleu de méthylène:

Si on agite la solution de bleu de méthylène en l’air, il deviendra bleu de nouveau:

On peut exercer cette réaction pour détérminer, si le lait est bouilli ou non.

La comparaison de potentiel redox de riboflavine et de bleu de méthylène.

Le potentiel redox est la mesure de la capacité des molécules d’échanger les électrons. la substance à potentiel d'oxydo-réduction majeur oxyde la substance à potentiel d'oxydo-réduction mineur. Quand on observe le changement de couleur des indicateurs redox dans la solution examinée, on emploie les mesures potentiométrique et la méthode colorimétrique. Habituellement ces indicateurs sont sans couleur en état réduit et possèdent la couleur en état oxydé. Pour chaque indicateur la zone de transition est liée à la valeur caractéristique de lui E’_o. Par exemple, pour le bleu de méthylène (± 2 e) E’_o fait +0,011 B, NAD⁺ (± 2 e) – 0,320 B, pour la riboflavine (± 2 e) – 0,208 B, le cytochrome c (± 2 e) + 0,260 B. En comparant les potentiels redox standards de ces systèmes, on peut faire la conclusion que le bleu de méthylène est convenant pour la détérmination des formes réduites des oxydoréductases nicotinamidiques et de flavine.

On met dans le tube à essai 5-6 gouttes d’eau, 1 goutte de suspension de riboflavine et on ajoute goutte-à-goutte la solution de bleu de méthylène jusqu’à l’apparition de coloration bleue ou bleue-verte. On met dans cette solution un morceau de zinc et 1 goutte de l’acide chlorhydrique concentrée. L’hydrogène libéré commence à diminuer le potentiel redox du système, a lieu la réduction de bleu de méthylène et de riboflavine. La réduction de bleu de méthylène est plus rapide, c’est pourquoi la solution devient tout d’abord verte, puis jaune-verte ou rose. On met la solution faiblement coloré dans l’autre tube et observe le changement de couleur. L’hydrogène ne se forme plus, son résidus passe en l’air. La forme réduite de riboflavine transmet à travers le bleu de méthylène les électrons et les ions d’hydrogène sur l’oxygène d’air, et la solution jaunit. Après ça le bleu de leucométhylène s’oxyde, et la couleur de solution passe de verte à bleue.

Date: 2016-01-14; view: 554