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La détermination de la catalase par la méthode de A.N. Bach et de A.I. Oparine.

On frotte 2 g de la carotte crue avec le sable de quartz dans le mortier, en ajoutant graduellement 2-3 ml de l'eau. Pour la neutralisation on ajoute sur le bout de la spatule le carbonate du calcium avant la cessation du dégagement du gaz carbonique. On transfère la masse frottée au matras mesuré et on mène par l'eau jusqu'à 100 ml. On laisse le mélange pendant 30 minutes, après quoi la filtre. Au matras conique sur 200 ml on prend par le compte-gouttes 25 ml de 0,1 n solution du peroxyde de l'hydrogène et on ajoute là-bas par le compte-gouttes 20 ml les extractions de l’enzymes. Dans 30 minutes on cesse l'action de l’enzyme par l'augmentation 5 ml 10% de la solution de l'acide sulfurique et on fait le titrage du mélange par 0,1 n solution du permanganate du potassium (avant la formation de la peinture rose stable pendant 1 minute). On marque la quantité de ml de la solution du permanganate du potassium qui était depensé pour le titrage du peroxyde de l'hydrogène resté. On fait simultanément le contrôle avec la chauffe inactivée dans le bain-marie bouillant pendant 5 minutes par la solution enzymatique (20 ml). À cette solution après le refroidissement on ajoute 25 ml de 0,1 n solution du peroxyde de l'hydrogène. On laisse le mélange pendant 30 minutes, après quoi on ajoute 5 ml de 10% de la solution de l'acide sulfurique et fait le titrage par 0,1 n solution du permanganate du potassium. On marque la quantité de ml du permanganate du potassium qui était depensé pour le titrage de toute la quantité du peroxyde de l'hydrogène. Selon la différence entre le titrage expérimenté et de contrôle on trouve la quantité du permanganate équivalente à la quantité décomposé par l’enzyme du peroxide de l'hydrogène.

On calcule l'activité de l'enzyme dans les unités standards internationales Å conformément à l'équation de la réaction

2Î2 + 2ÊÌnÎ4 + 3H2SO4 ® 2MnSO4 + K2SO4 + 5Î2 + 8Í2Î

en utilisant la formule:

,

Vê – le volume de 0,1 n solution du permanganate du potassium, qui serve du titrage pour l'essai de contrôle, ml;

Vîï – le volume de 0,1 n solution du permanganate du potassium, qui serve du titrage pour l'essai empirique, ml;

100 – le volume de l'extrait de la carotte, ml;

1,7 – la masse de peroxyde d’hydrogène, correspondant à 1 ml de 0,1 n solution du permanganate du potassium, mg;

20 – le volume de l'extrait de la carotte, qui serve du titrage, ml;

2 – la masse de la carotte, g;

30 – la durée de l'expérience, min;

0,034 – la masse de 1 mcmole de peroxyde d’hydrogène, mg

 


Date: 2016-01-14; view: 462


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